Microscopisch onderzoek
levende preparaten
Om de eigenschappen van de bacterie(cel) of gistcel te onderzoeken moet je van de bacterie(cultuur) of het monster dat je wil onderzoeken een preparaat voor de microscoop maken. Dat kan met bacteriën en andere cellen "in levende lijve", denk aan watermonsters en culturen waarbij de beweeglijkheid ook wilt zien.
Daarna kan de cellen in het preparaat ook nog gekleurd worden om een beter contrast te krijgen van de cel met zijn omgeving.
Ongekleurd dekglaspreparaat
De meest eenvoudige methode om micro-organismen te observeren is m.b.v. een dekglas- of waterpreparaat. Het laat de organismen in levende lijve zien zonder eventuele vervormingen of veranderingen in grootte als gevolg van fixatie en kleuring. Een nadeel is dat er vooral bij bacteriën weinig contrast is met de omgeving. Reden om deze preparaten onder een fase-contrast- of donkerveldmicroscoop te bekijken.
UITVOERING
Wees tijdens onderstaande procedure bedacht op besmettingsgevaar, laat een preparaat niet onbeheerd liggen.
Merk het schone, vetvrije objectglas.
Breng met een steriele pasteurpipet of entnaald een druppel vloeistof(cultuur) op het objectglas.
Betreft het koloniemateriaal, breng dan met een geflambeerde entnaald een druppel fysiologische zout oplossing op het voorwerpglas. Wrijf hierna met de opnieuw uitgegloeide entnaald het koloniemateriaal aan de rand van de druppel uit en suspendeer het in de vloeistof.
Zet een schoon dekglas schuin op het objectglas en laat dit (ondersteund door bv. een entnaald) langzaam zakken waardoor de vorming van luchtbellen wordt voorkomen.
Snelle uitdroging wordt voorkomen door het preparaat te omranden met nagellak of vaseline.
Beoordeel het preparaat en breng hierna het objectglas in 70% ethanol en het dekglas in een stafilexoplossing.
Gekleurd dekglaspreparaat (vitaalkleuring)
In dit geval worden de bacteriën gekleurd zonder dat ze (op korte termijn) vergiftigd worden.
UITVOERING
Meng het te onderzoeken materiaal met een entoog methyleenblauw(0,01%) of kristalvioletoplossing(=O,05%).
Voor de rest verloopt de uitvoering als boven beschreven bij het dekglaspreparaat.
Hangende druppel preparaat
Om de beweeglijkheid van micro-organismen te beoordelen gebruikt men bij voorkeur dit preparaat.
UITVOERING
Neem een schoon objectglas met uitgeslepen holte (Koch-glas). Breng rond deze uitholling een dunne ring vaseline aan:
Neem een schoon dekglaasje en leg in het midden een druppel bacterie-suspensie met behulp van een entoog:
Leg nu het objectglas op het dekglas zodanig dat de uitholling zich boven de druppel bevindt. Druk het objectglas voorzichtig aan voor een goede afsluiting:
Draai nu het geheel om zodat de dekglaszijde boven komt en de druppel hangt:
Beoordeel het preparaat door de rand van de druppel in het centrum van het gezichtsveld van een klein objectief te brengen en scherp te stellen. Draai vervolgens het 40x objectief voor en bekijk hier het preparaat mee:
